RNAprep Pūnaewele FFPE Maʻemaʻe

ʻAʻole lawa ka lysis cell A-1 a i ʻole ka homogenization

---- Hoʻoemi i ka hoʻohana ʻana i ka laʻana, hoʻonui i ka nui o ka buffer lysis, hoʻonui i ka homogenization a me ka manawa lysis.

ʻO ka nui o ka laʻana A-2

---- E hoʻemi i ka nui o ka laʻana i hoʻohana ʻia a hoʻonui paha i ka nui o ka buffer lysis.

A-1 lawa ʻole ka lysis pūnaewele a i ʻole ka homogenization

---- Hoʻoemi i ka hoʻohana ʻana i ka laʻana, hoʻonui i ka nui o ka buffer lysis, hoʻonui i ka homogenization a me ka manawa lysis.

ʻO ka nui o ka laʻana A-2

---- E nānā i ka nui o ka hiki ke hana.

ʻAʻole elute loa ʻo A-3 RNA mai ke kolamu

---- Ma hope o ka hoʻohui ʻana i ka wai RNase-Free, waiho iā ia no kekahi mau minuke ma mua o ka centrifuging.

A-4 Ethanol i ka eluent

---- Ma hope o ka holoi ʻana, centrifuge hou a hemo i ka pale holoi holoi i ka hiki.

ʻAʻole hoʻopau loa ʻia ka moʻomeheu A-5 cell

---- Ke ʻohiʻohi ʻana i nā pūnaewele, e ʻoluʻolu e wehe i ka moʻomeheu moʻomeheu i hiki.

A-6 ʻAʻole mālama nui ʻia nā pūnaewele i RNAstore

---- ʻoi aku ka nui o ka nui RNAstore ma mua o ka waena waena moʻomeheu moʻomeheu; no laila e hoʻonui ʻia ka ikaika centrifugal. Kuhi ʻia e centrifuge ma 3000x g.

A-7 Low RNA ʻike a me ka nui i ka hāpana

---- E hoʻohana i kahi laʻana maikaʻi e hoʻoholo inā hopena ka hopena haʻahaʻa e ka hāpana.

A-1 ʻAʻole hou nā mea

---- Pono e mālama pono ʻia nā mea hou i loko o ka nitrogen wai a i ʻole hoʻokomo koke ʻia i loko o ka mea reagent RNAstore e hōʻoia i ka hopena pōʻalo.

ʻO ka nui o ka laʻana A-2

---- Hoʻoemi i ka nui o ka laʻana.

A-3 RNase hoʻowahāwahān

---- ʻOiai ʻaʻole i loaʻa ka buffer i ka pahu i ka RNase, maʻalahi e hoʻohaumia iā RNase i ka wā o ka hana unuhi ʻana a lawelawe ʻia me ka mālama.

Hoʻohaumia A-4 Electrophoresis

---- E kuapo i ka pale ʻaila electrophoresis a hōʻoia i ka manuahi a me ka hoʻouka Buffer me ka hoʻowahāwahā ʻole o RNase.

A-5 Nui loa ka hoʻouka ʻana no electrophoresis

---- E ho'ēmi i ka nui o ka hoʻouka ʻana o nā laʻana, ʻaʻole pono ka hoʻouka ʻana o kēlā me kēia luawai ma mua o 2 μg.

A-1 Laʻana nui loa

---- Hoʻoemi i ka nui o ka laʻana.

A-2 Loaʻa i kekahi mau laʻana kahi ʻike DNA kiʻekiʻe a hiki ke mālama ʻia me DNase.

---- Hana i ka mālama RNase-Free DNase i ka hopena RNA i loaʻa, a hiki ke hoʻohana pololei ʻia ka RNA no nā hoʻokolohua hope aʻe ma hope o ka lapaʻau ʻana, a i ʻole hiki ke hoʻomaʻemaʻe hou ʻia e nā pahu hoʻomaʻemaʻe RNA.

No nā aniani, hoʻomoʻa ʻia ma 150 ° C no 4 h. No nā ipu ea, hoʻohuʻu i loko o 0.5 M NaOH no 10 mau min, a laila holoi pono ʻia me ka wai ʻole RNase a laila sterilize e hoʻopau loa iā RNase. Nā reagents a i ʻole nā ​​hāʻina i hoʻohana ʻia i ka hoʻokolohua, ʻo ka wai hoʻi, pono me ka manuahi o RNase. E hoʻohana i ka wai ʻole RNase no nā hoʻomākaukau hoʻomākaukau (hoʻohui i ka wai i kahi ʻōmole aniani maʻemaʻe, e hoʻohui iā DEPC i ka hopena hope loa o 0.1% (V / V), hoʻoluliluli i ka pō a me ka autoclave).