■ Pahuhopu: Hana ʻia ia no nā mea kanu mea paʻakikī e lawe, e like me nā polysaccharides a me nā mea kanu waiwai polyphenolics. Hoʻonui maikaʻi ʻia ke kaʻina, a hilinaʻi nā hopena.
■ Lawe kūpono o gDNA: hoʻolako ʻia ʻo DNase I kiʻekiʻe loa no ka lawe wikiwiki ʻana o gDNA ma ka kolamu.
■ Maʻalahi a wikiwiki: hiki ke hoʻopau i nā hoʻokolohua unuhi RNA ma waena o 1 hola.
■ Palekana a me ka hoʻohaʻahaʻa haʻahaʻa: ʻaʻohe pono o nā mea olaola ʻona e like me phenol a me chloroform e pono ai.
Hiki ke hoʻohana pololei ʻia kēia kini no nā hoʻokolohua biology molekiola like ʻole me RT-PCR, PCR manawa maoli, Northern Blot, Dot Blot, kānana PolyA, unuhi in vitro, anamanaʻo palekana RNase, a me ka cloning, a pēlā aku.
Hiki ke hoʻonohonoho pono ʻia nā huahana āpau no ODM / OEM. No nā kikoʻī,e kaomi i ka lawelawe i hoʻopilikino ʻia (ODM / OEM)
Lawe ʻia ka huina RNA mai ka 100 mg fleshes o ka maiʻa, watermelon, ʻāpala a me ka pea, kōpala o kaʻuala a me kaʻuala, lau o ka pulupulu, rose, alfalfa, raiki a me nā nila kui keʻokeʻo ma ka hoʻohana ʻana iā RNAprep Pure Plant Plus Kit. 4-6 μl o 30 μl eluates i hoʻouka ʻia i kēlā me kēia laina. M: TIANGEN Marker III; Lawe ʻia ka electrophoresis ma 6 V / cm no 30 min ma ka agarose 1%. Nā hopena: Hiki i ka RNAprep Pure Plant Plus Kit ke lawe i ka maʻemaʻe kiʻekiʻe, hua kiʻekiʻe a me ka maikaʻi piha RNA piha mai nā polysaccharides & polyphenolics-waiwai mea kanu. |
ʻAʻole lawa ka lysis cell A-1 a i ʻole ka homogenization
---- Hoʻoemi i ka hoʻohana ʻana i ka laʻana, hoʻonui i ka nui o ka buffer lysis, hoʻonui i ka homogenization a me ka manawa lysis.
ʻO ka nui o ka laʻana A-2
---- E hoʻemi i ka nui o ka laʻana i hoʻohana ʻia a hoʻonui paha i ka nui o ka buffer lysis.
A-1 lawa ʻole ka lysis pūnaewele a i ʻole ka homogenization
---- Hoʻoemi i ka hoʻohana ʻana i ka laʻana, hoʻonui i ka nui o ka buffer lysis, hoʻonui i ka homogenization a me ka manawa lysis.
ʻO ka nui o ka laʻana A-2
---- E nānā i ka nui o ka hiki ke hana.
ʻAʻole elute loa ʻo A-3 RNA mai ke kolamu
---- Ma hope o ka hoʻohui ʻana i ka wai RNase-Free, waiho iā ia no kekahi mau minuke ma mua o ka centrifuging.
A-4 Ethanol i ka eluent
---- Ma hope o ka holoi ʻana, centrifuge hou a hemo i ka pale holoi holoi i ka hiki.
ʻAʻole hoʻopau loa ʻia ka moʻomeheu A-5 cell
---- Ke ʻohiʻohi ʻana i nā pūnaewele, e ʻoluʻolu e wehe i ka moʻomeheu moʻomeheu i hiki.
A-6 ʻAʻole mālama nui ʻia nā pūnaewele i RNAstore
---- ʻoi aku ka nui o ka nui RNAstore ma mua o ka waena waena moʻomeheu moʻomeheu; no laila e hoʻonui ʻia ka ikaika centrifugal. Kuhi ʻia e centrifuge ma 3000x g.
A-7 Low RNA ʻike a me ka nui i ka hāpana
---- E hoʻohana i kahi laʻana maikaʻi e hoʻoholo inā hopena ka hopena haʻahaʻa e ka hāpana.
A-1 ʻAʻole hou nā mea
---- Pono e mālama pono ʻia nā mea hou i loko o ka nitrogen wai a i ʻole hoʻokomo koke ʻia i loko o ka mea reagent RNAstore e hōʻoia i ka hopena pōʻalo.
ʻO ka nui o ka laʻana A-2
---- Hoʻoemi i ka nui o ka laʻana.
A-3 RNase hoʻowahāwahān
---- ʻOiai ʻaʻole i loaʻa ka buffer i ka pahu i ka RNase, maʻalahi e hoʻohaumia iā RNase i ka wā o ka hana unuhi ʻana a lawelawe ʻia me ka mālama.
Hoʻohaumia A-4 Electrophoresis
---- E kuapo i ka pale ʻaila electrophoresis a hōʻoia i ka manuahi a me ka hoʻouka Buffer me ka hoʻowahāwahā ʻole o RNase.
A-5 Nui loa ka hoʻouka ʻana no electrophoresis
---- E ho'ēmi i ka nui o ka hoʻouka ʻana o nā laʻana, ʻaʻole pono ka hoʻouka ʻana o kēlā me kēia luawai ma mua o 2 μg.
A-1 Laʻana nui loa
---- Hoʻoemi i ka nui o ka laʻana.
A-2 Loaʻa i kekahi mau laʻana kahi ʻike DNA kiʻekiʻe a hiki ke mālama ʻia me DNase.
---- Hana i ka mālama RNase-Free DNase i ka hopena RNA i loaʻa, a hiki ke hoʻohana pololei ʻia ka RNA no nā hoʻokolohua hope aʻe ma hope o ka lapaʻau ʻana, a i ʻole hiki ke hoʻomaʻemaʻe hou ʻia e nā pahu hoʻomaʻemaʻe RNA.
No nā aniani, hoʻomoʻa ʻia ma 150 ° C no 4 h. No nā ipu ea, hoʻohuʻu i loko o 0.5 M NaOH no 10 mau min, a laila holoi pono ʻia me ka wai ʻole RNase a laila sterilize e hoʻopau loa iā RNase. Nā reagents a i ʻole nā hāʻina i hoʻohana ʻia i ka hoʻokolohua, ʻo ka wai hoʻi, pono me ka manuahi o RNase. E hoʻohana i ka wai ʻole RNase no nā hoʻomākaukau hoʻomākaukau (hoʻohui i ka wai i kahi ʻōmole aniani maʻemaʻe, e hoʻohui iā DEPC i ka hopena hope loa o 0.1% (V / V), hoʻoluliluli i ka pō a me ka autoclave).
Mai kona hoʻokumu ʻia ʻana, ke hoʻomohala nei kā mākou hale hana i nā huahana papa honua mua me ka hoʻopaʻa ʻana i ke ʻano
o ka maikaʻi ma mua. Ua loaʻa i kā mākou huahana ka maikaʻi maikaʻi loa i ka ʻoihana a me ka waiwaiabletrusty i waena o nā mea kūʻai aku a kahiko.