ʻOihana Pūnaewele PCR Māmā (me ka kala)

ʻO ka ʻōnaehana PCR maʻalahi ʻelua ʻāpana.

Pōpoki. Aʻole Ka hōʻiliʻili nui
4993003 250 U (2.5 U / μl)
4993004 500 U (2.5 U / μl)

ʻIke kikoʻī

Laʻana Hoʻokolohua

FAQ

Nā huahana huahana

Hiʻona

■ Kūpaʻa maikaʻi: Hoʻonohonoho paʻa ʻia ka ʻōnaehana kū hoʻokahi. Aia i loko o ka ʻōnaehana nā ʻāpana e pono ai no ka hoʻonui ʻana i ka PCR, e like me ka polymerase DNA thermostable, dNTPs, MgCl2 a me ka hopena buffer, a me nā ʻano stabilizers kūikawā, kahi e hoʻonui nui ai i ka paʻa o ka polymerase a me dNTP i ka mahana maʻamau a me 4 ℃.
■ Ka wikiwiki a maʻalahi hoʻi: Ka hana maʻalahi a wikiwiki. Hoʻohui wale i nā ʻāpana ʻelua i ka kaulike a laila hoʻohui i nā template a me nā primers e hoʻonohonoho i ka hopena, e pale ana i nā ʻanuʻu luhi o ka hoʻohui ʻana i nā ʻikena PCR i kēlā me kēia. E hoʻohaʻahaʻa i nā hemahema o ka laʻana a me ka haumia o ke keʻa, me ka hapa iki ma waena o nā ʻāpana like ʻole, a hiki ke hoʻohana ʻia i nā hoʻokolohua semi-nui.
■ Ke noi ākea a me ka ʻike nui.
■ Loaʻa i nā ʻōnaehana pane nā kala, a hiki ke hana pololei ʻia nā electrophoresis ma hope o ke kaʻina o PCR i hiki ai ke kaʻina hana wikiwiki a mālama-hana.

Na Makuahine e kaohi

ʻO ka maʻemaʻe o SDS-PAGE ma mua o 99%; ʻAʻole ʻike ʻia kahi hana o nuclease exogenous; Hiki ke hoʻonui pono ʻia ka gen hoʻokahi i ka genome kanaka; ʻAʻohe loli o ka hana nui ke mālama ʻia i ka mahana o ka lumi no hoʻokahi pule.

Kūpaʻa

Hiki ke mālama ʻia ka huahana me ka hoʻohana ʻana i ka ʻōnaehana PCR maʻalahi ʻelua ma 4 ° C no hoʻokahi mahina me ka loli ʻole o ka hana.

Kahua hana

Ka Papa Hana 1: Hoʻohui i nā ʻāpana like ʻole i ka like.

KaʻAnuʻu 2: E hoʻomaka koke i ka hoʻokolohua.

Ka Papa Hana 3: E kuhikuhi i nā electrophoresis no ka Mix me nā kala.

KaʻAnuʻu 4: Nā hopena hoʻokolohua maikaʻi.

Final Reaction Concentration:

Hiki ke hoʻonohonoho pono ʻia nā huahana āpau no ODM / OEM. No nā kikoʻī,e kaomi i ka lawelawe i hoʻopilikino ʻia (ODM / OEM)


  • Previous:
  • Aʻe:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Hoʻohana ʻia ka ʻōnaehana PCR maʻalahi ʻelua ʻāpana (Golden Easy PCR System). ʻO 50 μl ka ʻōnaehana hopena (Inā ʻokoʻa nā ʻōnaehana hopena, e ʻoluʻolu e hoʻonui a hoʻemi i ka nui o nā ʻāpana hopena e pili ana i kēia ʻōnaehana).
    Experimental Example Ka Hoʻohuli Manaʻo Hope
    Q: ʻAʻohe pūʻulu hoʻonui

    A-1 anakuhi

    ■ Loaʻa i ka template ka haumia o ka protein a i ʻole nā ​​mea kāohi Taq, a me nā mea āpau.

    ■ ʻAʻole piha ka denaturation o ka anakuhi —— Hoʻonui kūpono i ka mahana denaturation a hoʻolōʻihi i ka manawa denaturation.

    ■ Hoʻohilahila anakuhi —— Hoʻomākaukau hou i ke anakuhi.

    ʻO ka Primer A-2

    ■ Nā maikaʻi maikaʻi ʻole o nā primers ——Re-synthesize i ka primer.

    ■ Hoʻohaʻahaʻa Primer —— Hoʻohui i nā primers hoʻoliʻiliʻi kiʻekiʻe i loko o ka liʻiliʻi o ka nui no ka mālama ʻana. Hōʻalo i nā anuanu he nui a hoʻoheheʻe a lōʻihi paha 4 ° C cryopreserve.

    ■ Hoʻolālā kūpono ʻole o nā primers (e like me ka lōʻihi o ka primer ʻaʻole lawa, dimer i hoʻokumu ʻia ma waena o nā primers, a me nā mea ʻē aʻe).

    A-3 Mg2+noʻonoʻo

    ■ Mg2+ haahaa loa ka noonoo —- E hoonui pono i ka Mg2+ noonoo ana: Optimize ka Mg2+ ka noʻonoʻo ma o ka moʻo o nā hopena mai 1 mM a 3 mM me kahi manawa o 0.5 mM e hoʻoholo ai i ka Mg maikaʻi loa2+ ka noʻonoʻo no kēlā me kēia anakuhi a me ka primer.

    A-4 Annealing wela

    ■ Hoʻopilikia ka mahana annealing kiʻekiʻe i ka hoʻopaʻa ʻana o ka primer a me ka template. —E hoʻemi i ka mahana annealing a hoʻonui i ke ʻano me ka gradient o 2 ° C.

    A-5 manawa hoʻolōʻihi

    ■ Manawa hoʻolōʻihi pōkole —- Hoʻonui i ka manawa hoʻolōʻihi.

    Q: He maikaʻi maikaʻi ʻole

    Phenomena: hōʻike pū kekahi nā laʻana maikaʻi ʻole i nā kāʻei hoʻonohonoho hoʻonohonoho.

    A-1 Contamination o PCR

    ■ Ke hoʻohaumia i ke kaʻina o nā pahuhopu a i ʻole nā ​​huahana hoʻonui ʻana— Pono e hoʻoponopono hou i nā reagents a i ʻole nā ​​pono hana e hoʻopau i nā waikawa nukelika e noho nei, a e hoʻoholo ʻia ka noho ʻana o ka haumia ma o nā hoʻokolohua kaohi maikaʻi ʻole ʻana.

    ■ Hoʻohaunaele Reagent ——Aliquot i nā mea reagents a mālama i ka mahana haʻahaʻa.

    A-2 Kuhina Nuir

    ■ Mg2+ haahaa loa ka noonoo —- E hoonui pono i ka Mg2+ noonoo ana: Optimize ka Mg2+ ka noʻonoʻo ma o ka moʻo o nā hopena mai 1 mM a 3 mM me kahi manawa o 0.5 mM e hoʻoholo ai i ka Mg maikaʻi loa2+ ka noʻonoʻo no kēlā me kēia anakuhi a me ka primer.

    ■ ʻO ka hoʻolālā primer kūpono ʻole, a he homology ke kaʻina hoʻokūkū me ke kaʻina hoʻokūkū ʻole. —— Nā hana hoʻolālā hou.

    Q: Hoʻonui hoʻonui kiko ʻole

    Phenomena: Kūlike ʻole nā ​​hui hoʻonui PCR me ka nui i manaʻo ʻia, nui a liʻiliʻi paha, a i kekahi manawa ʻelua mau band amplification kikoʻī a me nā hui hoʻonui ʻole kikoʻī.

    A-1 mea hoʻomaka

    ■ ʻIno kikoʻī maikaʻi ʻole

    ——Re-design primer.

    ■ Kiʻekiʻena ka piʻo primer ——E hoʻonui pono i ka mahana denaturation a hoʻolōʻihi i ka manawa denaturation.

    A-2 Mg2+ noʻonoʻo

    ■ Ka Mg2+ kiʻekiʻena kiʻekiʻe --—E hoʻoliʻiliʻi pono i ka hoʻonui Mg2 +: Optimize ka Mg2+ ka noʻonoʻo ma o ka moʻo o nā hopena mai 1 mM a 3 mM me kahi manawa o 0.5 mM e hoʻoholo ai i ka Mg maikaʻi loa2+ ka noʻonoʻo no kēlā me kēia anakuhi a me ka primer.

    A-3 polymerase wela loa

    ■ Ka nui o ka ʻenemika nui loa—— Hoʻoemi kūpono i ka nui o ka ʻenemika i nā wā o 0.5 U.

    A-4 Annealing wela

    ■ Haahaa loa ka mahana annealing —— Hoʻonui kūpono i ka mahana annealing a i ʻole lawe i ka hana annealing pae ʻelua.

    Nā pōʻaiapuni A-5 PCR

    ■ Nui loa nā pōʻaiapuni PCR ——E hoʻemi i ka helu o nā pōʻai PCR.

    Q: Nā kāʻei patch a smear paha

    A-1 mea hoʻomaka——Pea kikoʻī ——Re-hoʻolālā i ka primer, hoʻololi i ke kūlana a me ka lōʻihi o ka primer e hoʻomaikaʻi i kāna kikoʻī; a i ʻole hana i ka PCR pūnana.

    A-2 Template DNA

    ——ʻAʻole maʻemaʻe ke anakuhi ——E hoʻomaʻemaʻe i ke anakuhi a huki paha i ka DNA me nā pahu hoʻomaʻemaʻe.

    A-3 Mg2+ noʻonoʻo

    ——Mg2+ kiʻekiʻena kiʻekiʻe --—E hoʻemi pono i Mg2+ noonoo ana: Optimize ka Mg2+ ka noʻonoʻo ma o ka moʻo o nā hopena mai 1 mM a 3 mM me kahi manawa o 0.5 mM e hoʻoholo ai i ka Mg maikaʻi loa2+ ka noʻonoʻo no kēlā me kēia anakuhi a me ka primer.

    A-4 dNTP

    ——Ua kiʻekiʻe loa ka hoʻopaʻapaʻa ʻana o dNTPs -

    A-5 Annealing wela

    ——To low annealing mahana ——E hoʻonui pono i ka mahana annealing

    Nā pōʻaiapili A-6

    ——Ua nui loa nā pōʻaiapuni ——E hōʻoia i ka helu pōʻaiapuni

    Q: Ehia mau template DNA e hoʻohui ʻia i kahi ʻōnaehana PCR 50 μl?
    ytry
    Q: Pehea e hoʻonui ai i nā ʻāpana lōʻihi?

    ʻO ka hana mua e koho i ka polymerase kūpono. ʻAʻole hiki i ka Taq polymerase maʻamau ke hoʻoponopono ma muli o ka nele o ka hana 3'-5 'exonuclease, a e hōʻemi nui ka mismatch i ka pono hoʻonui o nā ʻāpana. No laila, ʻaʻole hiki i ka Taq polymerase maʻamau ke hoʻonui pono i nā ʻāpana pahuhopu i ʻoi aku ma mua o 5 kb. Pono e koho ʻia ʻo Taq polymerase me kahi hoʻololi kūikawā a i ʻole polymerase hilinaʻi kiʻekiʻe e hoʻomaikaʻi ai i ka pono hoʻonui a hoʻokō i nā pono o ka hoʻonui ʻana i nā ʻāpana lōʻihi. Hoʻohui ʻia, koi ʻia ka hoʻonui ʻana i nā ʻāpana lōʻihi e like me ka hoʻoponopono ʻana o ka hoʻolālā primer, ka manawa denaturation, manawa hoʻolōʻihi, buffer pH, a me nā mea maʻamau. I mea e pale aku ai i ka hōʻino template, pono e hoʻēmi ʻia ka manawa denaturation ma 94 ° C i 30 sec a i ʻole emi no ka pōʻaiapuni, a me ka manawa e piʻi ai ka mahana i 94 ° C ma mua o ka hoʻonui ʻana ma mua o 1 min. Eia kekahi, ke hoʻonohonoho nei i ka mahana hoʻolōʻihi ma kahi o 68 ° C a hoʻolālā i ka manawa hoʻolōʻihi e like me ka helu o 1 kb / min hiki ke hōʻoia i ka hoʻonui ʻana i nā ʻāpana lōʻihi.

    Q: Pehea e hoʻomaikaʻi ai i ka hoʻonui pono o PCR?

    Hiki ke hoʻemi ʻia ka helu hewa o ka hoʻonui ʻana i ka PCR ma o ka hoʻohana ʻana i nā polymerases DNA like ʻole me ke kūpaʻa kiʻekiʻe. Ma waena o nā Taq DNA polymerases i loaʻa a hiki i kēia manawa, ʻo Pfu enzyme ka hapa haʻahaʻa haʻahaʻa a me ke kūpaʻa kiʻekiʻe loa (e ʻike i ka papa i hoʻopili ʻia). Ma waho aʻe o ke koho ʻana o ka enzyme, hiki i nā mea noiʻi ke hōʻemi hou i ka helu mutation PCR ma o ka hōʻoia ʻana i nā kūlana hopena, e like me ka hoʻonui ʻana i ke ʻano buffer, ka nui o ka polymerase thermostable a me ka hoʻonui ʻana i ka helu pōʻai PCR.

    Kākau i kāu leka ma aneʻi a hoʻouna iā mākou